應用濾(lv)袋(dai)技術測定中性洗(xi)滌(di)纖(xian)維（NDF）的方法

Ringbio纖維分析(xi)儀

A. 試劑

(a)稱取(qu)30.0g十二(er)烷基硫酸鈉（USP）；18.61g 乙(yi)(yi)二胺四乙(yi)(yi)酸二鈉（Na₂EDTA）；6.81g四(si)硼酸鈉（Na₂B₄O₇）十水；4.56g磷酸氫二鈉(na)（Na₂HPO₄）-無水；10.0 ml三(san)甘醇C₆H₁₄O₄；全部溶解(jie)在1L水中，適當的攪(jiao)拌(ban)和(he)加熱(re)有(you)助于溶解。檢查適當的pH在(zai)6.9—7.1。

(b) α-淀粉酶(Alpha-amylase) –熱穩定細菌(jun)α-淀粉酶：活性(xing)為17,400 單位/ mL。1個活性單位表示(shi)能(neng)將1 mg可(ke)溶性淀粉用30 min水解(jie)。

(c) 無水亞硫酸鈉（Na₂SO₃）。

(d) 丙酮：無色，并(bing)且蒸發后無殘渣。

B. 安全注意

(a) 丙酮易燃，操(cao)作(zuo)時應在通風櫥中(zhong)進行，避免(mian)吸(xi)入或與皮(pi)膚接(jie)觸。將濾袋放(fang)入烘箱(xiang)之(zhi)前，要確保濾袋*干燥，丙酮*揮(hui)發。

(b) 十二烷基硫酸鈉(na)對黏(nian)膜有(you)刺激，因(yin)此操作時要帶防塵口罩和手套。

C.設備

(a) 消(xiao)化裝置- Ringbio纖(xian)維分析儀

(b) 濾袋- Ringbio濾袋

(c) 封口(kou)機(ji)

(d) 干(gan)燥(zao)器

(e) 分(fen)析天平-至0.1mg

(f) 電(dian)熱干燥箱

(g) 耐溶劑記號筆

D. 步驟

(a) 濾袋和樣品的準備(bei)

1) 用耐溶(rong)劑的記號筆給(gei)濾袋編號，稱重(m ₁)。

2) 直接準確稱(cheng)取0.5g (± 0.05 g )制備好(hao)的樣(yang)品 (m) 于濾袋中。樣品需要(yao)粉碎過(guo)1mm篩。

3) 在距離濾(lv)袋上(shang)邊緣大(da)約4 mm用(yong)封口機封口。然后將樣品在濾袋中展平(ping)，均勻(yun)分(fen)布。

4) 至(zhi)少取(qu)一個空白濾(lv)袋(C₁)，同(tong)時做空白測定。

5) 一次 多(duo)可以在濾袋(dai)架上放24個濾袋。無論放置濾袋數量多少，8層(ceng)濾袋架上托(tuo)盤要全部使用，每層(ceng)放三個濾袋。層(ceng)與層(ceng)之間(jian)錯開120度。然后將裝有濾袋的支架放(fang)入(ru)纖維分析(xi)儀(yi)消煮器中，然后將金屬壓(ya)錘放在(zai)支架頂(ding)部，以確保(bao)消(xiao)煮過程中(zhong)不浮起。

6) 樣(yang)品含有大(da)豆產品或脂肪(fang)超(chao)過5% ，將裝有樣品的濾(lv)袋(dai)放(fang)入(ru)帶蓋玻璃容器(qi)中(zhong)，加丙(bing)酮使濾(lv)袋(dai)*浸沒，蓋好蓋子。搖動容器(qi)10次，浸泡10 分鐘(zhong)。然(ran)后(hou)更換新的(de)丙(bing)酮，重復上述操(cao)作一次。 后(hou)將(jiang)濾(lv)袋取出，放在網篩上涼干。

例(li)外(wai)：烘(hong)(hong)烤(kao)大豆(dou)，由于烘(hong)(hong)烤(kao)大豆(dou)的(de)特殊性(xing)，需要采(cai)用改進(jin)后的(de)下(xia)面脫脂方法。將裝(zhuang)有(you)樣(yang)品的(de)濾袋放入帶蓋(gai)玻(bo)璃容器中，加丙(bing)酮使濾袋*浸(jin)沒，蓋(gai)好(hao)蓋(gai)子。搖(yao)動容器10次，然后更換新的丙(bing)酮，浸泡12小時。取(qu)出濾袋，放(fang)在網篩上涼干。

(b) 當處(chu)理24個濾袋時(shi)，向2000 mL中性洗滌劑溶液中加(jia)無水亞硫酸鈉20 g (0.5 g/50 mL ND 溶液) 和 4.0 g 熱穩(wen)定α-淀粉酶。讓無水(shui)亞(ya)硫酸鈉在溶液中(zhong)充(chong)分(fen)溶解。向容器中(zhong)加入該溶液。如果處理樣品少于20 個濾袋，按(an)照每個濾袋加100 mL酸(suan)溶(rong)液，但不能少于1500 mL，確(que)保濾袋托盤*浸沒。

(c)  打開HEAT+AGITATE開關(guan)，確(que)保濾袋支架攪拌正常。蓋上蓋子并*密封好。 儀器將加熱并維持溶液溫度100°C。 設置(zhi)處理時間75分鐘(zhong)，包括加(jia)熱升溫(wen)時間。

(d) 時間(jian)到后加熱(re)攪(jiao)拌自動(dong)關(guan)停，消(xiao)煮結束(shu)，按下EXHAUST按鍵(jian)，排(pai)出廢(fei)液，在打開蓋子之前一定將熱的溶液排(pai)完(wan)。

*警示(shi)：消煮器中的溶液是有壓力的。 在打(da)開蓋子(zi)之前一定將(jiang)廢液(ye)閥打(da)開以(yi)釋放壓力。

(e) 溶液(ye)排完后(hou)，打開(kai)蓋子，關(guan)閉排液(ye)閥(fa)，加2L (70°C~90°C) 蒸餾水，并且(qie)第(di)1和第(di)2次淋洗時(shi)同(tong)時(shi)加(jia)α-淀(dian)粉(fen)酶，放(fang)下(xia)蓋子，但(dan)不旋緊。按下(xia)FLUSH按鍵(jian)，攪拌3~5 分(fen)鐘。按下EXHAUST按(an)鍵，排掉廢液，重復(fu)2次，共淋洗3次(ci)。

(f) 后(hou)(hou)一次淋洗后(hou)(hou)，加(jia)冷的自來水以操作和使冷卻(que)容器(qi)，為下(xia)輪(lun)測(ce)定做好準備(bei)。排干水，從容器(qi)中取出帶濾(lv)袋的支(zhi)架(jia)。將濾(lv)袋從濾(lv)袋支(zhi)架(jia)上(shang)取下(xia)來，輕輕擠壓去(qu)掉多余的水。然(ran)后(hou)(hou)將濾(lv)袋放(fang)入250 mL 燒杯中，加丙酮至浸(jin)沒濾袋，浸(jin)泡3~5 分(fen)鐘 ，然后(hou)取出并輕輕擠壓(ya)去掉多余的丙(bing)酮。

(g) 在通風櫥中(zhong)展開濾袋，讓其自(zi)然干燥。*干燥后放入(ru)102°C±2°C 烘箱烘干4小(xiao)時(shi)。

*警告：在丙酮*揮發掉之前不能把濾袋放入烘(hong)箱中。

(q) 從(cong)烘箱中(zhong)取出濾(lv)袋，直(zhi)接放入干燥(zao)器(qi)中(zhong)冷卻至室溫，然后稱重(zhong)（m₂）。

E. 計算

試(shi)樣中(zhong)中(zhong)性洗滌纖維質量分(fen)數按以下公式計算(suan)。

NDF (%) = (m2- (m1 x C1)) x 100 / m

其中： m1 為空袋(dai)質(zhi)量，g；m為樣品質量，g；m2 為提取處理后樣品殘(can)渣+濾袋質量，g；C1 為空白袋子校正系數(烘干后質量/原(yuan)來質量(liang))。